https://metasystems-international.com/en/products/solutions/micronuclei/
Mikronükleus (MN) testleri, bir ajanın DNA'ya zarar verme kabiliyetini ölçmek için toksikolojik tarama ve radyasyon biyodosimetrisinde kullanılır. Tahliller artık genotoksik karsinojenler için en başarılı ve güvenilir testler olarak kabul edilmektedir. İki ana MN testi modeli vardır: (a) sitokinez-blok MN testi (ayrıca in vitro MN testi olarak anılır ) ve (b) kemirgen eritrosit MN testi (ayrıca in-vivo olarak anılır) MN tahlili ).
Metafer yazılımı, her iki test için eksiksiz, gözetimsiz ve güvenilir görüntü alma ve analiz yapabilen akıllı iş akışlarını yönetir. Otomatik MN analizi, ilgili OECD yönergelerine uygundur ve İyi Laboratuvar Uygulamalarına (GLP) uygun olarak gerçekleştirilebilir.
Sitokinez bloğu mikronükleus testi, DNA hasarını, sitostasisi ve sitotoksisiteyi ölçmek için kapsamlı bir yöntemdir. Tahlil, hücre kültürlerine sitokalasin-B'nin (sitokinezi önleyen mitotik iğciğin bir inhibitörü) eklenmesinden oluşur. Sonuç olarak, bir nükleer bölünmeyi tamamlayan hücreler, çift çekirdekli görünümleriyle tanımlanır. DNA hasarı olayları, özellikle bir kez bölünmüş iki çekirdekli hücrelerde puanlanır.
Metafer yazılımı tarafından çalıştırılan bir tarama sistemi, in vitro MN numunelerini otomatik olarak tarar, çift çekirdekli hücreleri (tedaviden sonra bir hücre ayrımına tabi tutulan hücreler) güvenilir bir şekilde tanımlar ve bunları mikronüklei varlığı açısından analiz eder. Eşzamanlı olarak tüm tek çekirdekli çekirdekler sayılır ve kültürün çoğalma hızı hakkında geri bildirim sağlanır.
Analiz sonuçları, analiz edilen her bir hücreyi ilgili mikronükleus sayısıyla birlikte gösteren bir hücre galerisinde görüntülenir. Tüm veriler histogram olarak özetlenmiştir. Kullanıcılar, mikronükleus pozitif hücre sınıflarını seçebilir, galeriyi seçime göre filtreleyebilir ve böylece tüm hücrelerde gezinmeye gerek kalmadan otomatik sonuçları hızla onaylayabilir. Hücreler ve mikronüklei morfolojileri, kullanıcı tarafından uyarlanabilen parametre setlerine göre analiz edilir. Parametre optimizasyonu ve dolayısıyla puanlama standartlarının ayarlanması, otomatik bir kendi kendine optimizasyon aracı yardımıyla yapılır. Otomatik optimizasyon, en iyi görüntü işleme parametrelerini bulmak için de kullanılabilir.
Metafer MNScoreX yazılımı ile Micronucleus skorlaması sadece son derece sağlam değil, aynı zamanda son derece hızlıdır. Radyasyon biyodozimetrisi için çok önemli bir araç haline gelmiştir. Hakemli dergilerde yer alan birçok bağımsız çalışma, Metafer MNScoreX ile mikronükleus puanlamasının, özellikle iyonlaştırıcı radyasyon kaynaklarını içeren büyük bir kazanın varsayıldığı senaryolarda, radyasyon dozu tahmini için yararlı bir araç olduğunu göstermektedir.
Toksikolojide, test bileşiğinin sitostatik etkileri, mono-, bi- ve çok çekirdekli hücrelerin (CBPI) oranı değerlendirilerek ölçülür. Bu yöntem ayrıca ilgili OECD kılavuzunun ( OECD kılavuzu #487 ) bir parçasıdır . Metafer MNScore, çekirdeklerin morfoloji analiziyle hücrelerin durumunu otomatik olarak analiz eder ve CBPI'yi hesaplar. Akıllı iş akışı, ilgili OECD kılavuzu ve ayrıca GLP düzenleme çerçevesi ile tamamen uyumludur.
İn -vivo MN testi (kemirgen eritrosit MN tahlili) normalde test maddesiyle tedavi edilmiş kemirgenlerin kemik iliğini veya periferik kanını kullanır. Numuneden alınan kırmızı kan hücreleri, polikromatik (PCE; olgunlaşmamış) veya normokromatik (NCE; olgun) eritrositler olarak sınıflandırılır. PCE'de ana çekirdekler ekstrüde edilmiştir ve MN, aksi takdirde çekirdekli sitoplazmada geride kalır. Tedavi edilen hayvanlarda mikronükleer polikromatik eritrositlerin sıklığındaki bir artış, indüklenmiş kromozom hasarının bir göstergesidir. PCE ve NCE renkle ayırt edilir ( May-Gruenwald-Giemsa uygulandıktan sonra)leke) ve her iki popülasyon arasındaki oran, test maddesinin toksik yan etkilerinden kaynaklanan hücre döngüsü gecikmeleri hakkında bilgi taşır. İn-vivo MN testinin puanlama otomasyonunun sütun saflaştırılmış hücre solüsyonlarından hazırlanmış numuneler gerektirdiğini ve numunelerin sito-santrifüjleme ile hazırlanmasının önerildiğini bilmek önemlidir . Yalnızca bu şekilde slayt hazırlama güvenilir ve hatasız otomatikleştirilmiş analiz sağlar.
Metafer yazılımı ile in-vivo MN testinin otomasyonu tamamen gözetimsiz bir iş akışında yapılır. Metafer SCAN tarafından çalıştırılan tarama sistemi, numunenin görüntülerini otomatik olarak alır ve boyamanın yoğunluk aralığını analiz eder. Boyama kalitesine göre PCE ve NCE, renklerine göre otomatik olarak ayırt edilir. Tarama iş akışı, değişen boyama kaliteleri ve farklı PCE ve NCE oranlarıyla (örneğin, kemik iliği yerine periferik kan kullanılıyorsa) başa çıkacak kadar sağlamdır. PCE ve NCE renkleri tanımlandıktan sonra, her hücre sınıflardan birine atanır ve Metafer MetaCyte ile mikro çekirdekler tespit edilir. Tipik olarak, dakikada 1.000'den fazla hücre taranır ve işlenir.
Metafer MetaCyte ile in vivo MN testinin otomasyonu, ilgili OECD kılavuzu ( OECD kılavuzu #474 ) ve GLP düzenleme çerçevesi ile tamamen uyumludur.
